Plataforma de Citometría

La Plataforma de apoyo a la investigación de Citometría de flujo e Irradiación experimental pone a disposición de los investigadores, tanto pertenecientes al ibs.GRANADA como externos a este, el equipamiento y el asesoramiento científico-técnico necesario para llevar a cabo el análisis de la dispersión de la luz y de diferentes fluorescencias en células, microorganismos o unidades subcelulares como los exosomas, entre otros. Además, es posible la separación (sorting) en poblaciones o grupos homogéneos de interés. Todo ello encaminado a facilitar y desarrollar una investigación de calidad.

Esta plataforma se caracteriza por disponer entre sus múltiples Carteras de Servicio, una cartera para la Inmunofenotipificación de linfomas y leucemias en animales de experimentación, que actualmente es referente a nivel nacional.

Ubicada en la 1ª Planta Edificio Gerencia Antiguo Hospital San Cecilio, Avd. Madrid s.n de Granada.

Existen dos modalidades de prestación de servicios:

1. Uso de los equipos, en autoservicio o con apoyo del Técnico Responsable. Debido a la complejidad de uso de estos equipos, el investigador debe de aportar certificación de conocimiento del mismo. El coste del uso de los equipos viene especificado en el documento “Tarifas”.
2. Realización de Técnicas Específicas por parte de los Técnicos Responsables. El coste de estas técnicas es bajo presupuesto, ya que depende de la complejidad de las mismas y del número de muestras a realizar.

• • CF_01 - Cuantificación de citoquinas, proteínas de señalización celular, solubles e inmunoglobulinas mediante Citometría de Flujo. Método CBA
  • CF_02 - Inmunofenotipificación de linfomas y leucemias en animales de experimentación por citometría de flujo
  • CF_03 - Caracterización y aislamiento de Cancer Stem Cells por citometría de flujo
  • CF_04 - Determinación cualitativa y cuantitativa de daños en el ADN mediante citometría de flujo
  • CF_05 - Caracterización de poblaciones y subpoblaciones linfocitarias mediante citometría de flujo
  • CF-06 Estudios de apoptosis celular por citometría de flujo (Anexina V)
  • CF_07- Análisis del ciclo celular mediante la determinación de la fase celular por Citometría de Flujo
  • CF-08 Evaluación de la expresión de cadenas ligeras kappa/lambda en linfomas b por citometría de flujo
  • CF_09- Caracterización y aislamiento de Cancer Stem Cells en función de su actividad Aldh-1 y AldeRed por Citometría de Flujo
  • CF_10- Estudio de la producción de especies reactivas en leucocitos por citometría de flujo
  • CF_11- Estudio de la Proliferación Celular mediante Marcaje con CellTrace CFSE por Citometría de Flujo

Citómetro de flujo BD FACS Melody este equipo cuenta con 3 líneas láseres:

• Láser Violeta (405 nm): equipado con 3 detectores de fluorescencia
• Láser Azul (488 nm): equipado con 4 detectores de fluorescencia y 2 de dispersión de la luz.
• Láser rojo (638nm): cuenta con 2 detectores de fluorescencia

Tiene sistema de separación celular lo que permite la obtención de hasta 4 poblaciones puras homogénas en diferentes soportes (Tubos de citometría, eppendorf de 1.5 mL o falcon de 15 ML). Además, está equipado con la unidad de clonaje/célula única que permite la separación de una o más células por pocillo en placas multipocillo.

El equipo cuenta con una estación de trabajo equipada con el Software BD FACS Chorus para el control del equipo y el análisis de datos.

Citómetro de flujo BD FACS ARIA III actualizado: con 4 líneas de láser y 16 de detectores de fluorescencia (18 parámetros simultáneos):

• Láser Violeta (405 nm), equipado con 7 detectores de fluorescencia
• Láser Azul (488nm), permite detectar 2 fluorescencias y los parámetros morfométricos FSC/SSC
• Láser amarillo/verde (561 nm), cuenta con 4 detectores de fluorescencia
• Láser rojo (633nm), equipado con 3 detectores de fluorescencia

Con sistema de separación celular (hasta 4 poblaciones) y la unidad de Clonaje/célula Única (automatic cell deposition unit) que permite la deposición de una o más células en placas multipocillo, portaobjetos y tubos desde 0,5 hasta 15 mL (sistema Index Sort).

Todo ello con el software de adquisición y análisis DIVA 8

Citómetro espectral Cytek Northern Lights: Este equipo consta de 3 líneas láseres y un total de 38 detectores:

• Láser Violeta (405 nm) con 16 detectores para este láser.
• Láser Azul (488 nm) con 14 detectores:
• Laser rojo (638nm) con 8 detectores.

Lo que permite detectar hasta 38 parámetros de manera simultánea.

Los detectores son fotodiodos de avalancha (APD) de alta eficiencia cuántica.

Pueden utilizarse una gran cantidad de fluorocromos a la vez, ya que cubre el espectro desde los 420 hasta los 829 nm.

Cuenta con tres canales de dispersión de la luz, uno de dispersión hacia delante (Forward Scatter, FSC) y dos de dispersión lateral (Side Scatter, SSC):

• FSC: detector de alto rendimiento con un filtro de paso de banda de 488 nm.
• SSC Violeta: detector de alto rendimiento con un filtro de paso de banda de 405 nm.
• SSC Azul: detector de alto rendimiento con un filtro de paso de banda de 488 nm.

El equipo cuenta con una estación de trabajo equipada con el Software SpectroFlo, para la adquisición y análisis de datos.

Irradiador YXLON MaxiShot E200: equipo creado específicamente para la radiación celular en procesos experimentales.

Permite llevar a cabo irradiación a dosis bajas (a partir de 1Gy) y elevadas, por lo que puede ser de utilidad en una gran variedad de ensayos como son:

· El análisis de respuesta celular y orgánica después de haber sido expuestas a este tipo de estrés.

· Los estudios cinéticos de supervivencia tras diferentes dosis de radiación

· Determinación de la eficacia de terapia combinada (radio y quimioterapia) como tratamiento

· Estudios de la capacidad de reparación del ADN.

· Estudios básicos de radiosensibildiad celular y molecular